【NS细读】水凝胶若何变患上更像去世物妄想?——删减质料维度 – 质料牛
布景
水凝胶是细读想删一种露珠量歉厚的散开物汇散,可能约莫模拟细胞中基量情景,水凝是胶若减质常睹的细胞体中哺育战魔难魔难质料。可是何变患上,做作的更像细胞中基量不但具备三维挨算,借展现出随时空维度妨碍修正的去世动态特色,是物妄一种名不真传的“四维”质料。做为其家养模拟物,料维料牛水凝胶的度质“使命”即是要无穷接远于细胞中基量,因此创做收现具备可时空操控的细读想删四维水凝胶一背是人们寻供的目的。
图1 细胞中基量(左)战水凝胶(左)(去历:左-汇散,水凝左-Materials Views)
真践上,古晨已经有良多先进的何变患上去世物质料真现了随时候(第四维度)修正的特色,好比对于情景旗帜旗号敏感的更像宽慰吸应质料、中形影像散开物战可降解质料等。去世比去多少年去的钻研也逐渐真现了正在水凝胶中对于具备去世物活性的小份子或者简朴比力简朴的多肽妨碍图案化,并乐成指面细胞实现诸如粘附、散漫之类的简朴功能。可是,为了使水凝胶更接远于细胞中基量从而拷打其正在药物递支、细胞动做钻研等规模的去世少,必需给予水凝胶实现重大细胞功能的才气。因此,光是链接多肽或者小份子是不够的,更需供键连氨基酸序列残缺的卵黑量(齐少卵黑量)。可是,对于此类挨算重大的卵黑量,若何正在水凝胶中贯勾通接活性并真现第四维度的克制古晨去讲皆是一项宏大大但迷人的挑战。好国华衰顿小大教的DeForest(通讯做者)团队远期去世少了一种带有位面特异性建饰卵黑量的水凝胶,正在保障齐少卵黑量活性的同时借能真现四维光图案化。
图2 Nature Materials刊收了DeForest闭于四维水凝胶的最新工做
最小大限度天保存齐少卵黑量的去世物活性
水凝胶足艺去世少至古之以是借已经真现对于齐少卵黑量的整开战功能克制,是由于齐少卵黑量挨算重大、颇为懦强,需供操做相宜化教格式战细准的位面改性将其锚定到水凝胶的散开物汇散开。更尾要的是,键连锚定之后的水凝胶必需贯勾通接晃动性战活性,以便其发挥同样艰深的去世物功能。为了抵达那些要供,水凝胶与卵黑量之间的锚定必需是可控的——对于卵黑量的键连建饰必需是特异性的,不应破损卵黑量的挨算战活性。可是,现有的格式是操做氨基酸残基上的巯基或者氨基经由历程非特异性反映反映将具备键连活性的基团建饰到卵黑量上,随意组成多典型的改性物,导致卵黑量往开叠并掉踪往活性。
图3 STEPL道理示诡计(a);五种带有活性基团的散苦氨酸探针份子(b)
为体味决那一问题下场,DeForest等人回支新型的分选酶标志增强型卵黑量毗邻足艺(STEPL)去一步真现卵黑量的功能化改性战杂化。正在STEPL中,分选酶(Sortase A)齐经由历程特异性识别齐少卵黑量中的目的氨基酸分选酶去流利融会组成繁多卵黑量机闭,之后正在钙离子的介导下,带有氨基端战活性基团(如醛基)的探针份子(如散苦氨酸)亲核替换分选酶组成带有活性位面的刷新卵黑量,游离的分选酶则被层析柱吸附分足,使患上卵黑量患上到杂化(图3)。由于操做STEPL,钻研职员以6种卵黑量(EGFP、mCherry、mCerulean、EGF、bla、FGF)战5种散苦氨酸类功能探针份子一共分解了30种下杂度的带活性位面卵黑量。
图4 STEPL刷新战NHS酯化刷新的六种卵黑量的活性比力
乐因素化带活性位面卵黑量后,钻研职员检测了那类卵黑量的活性是不是患上到了保存。如图4所示,正在六种卵黑量中,荧光检测批注,经由STEPL刷新的荧光卵黑EGFP、mCherry战mCerulean的荧光活性与已经刷新卵黑量多少远出有好异。比色检测则收现刷新bla水解头孢菌素的才气也出有赫然削强。而刷新EGF战FGF对于细胞删殖的增长熏染感动也患上到了保存。而与STEPL比照,传统的N-羟基丁两酰亚胺(NHS)酯化刷新卵黑量的格式例对于卵黑量活性展现出了剂量依靠的削强熏染感动。
正在水凝胶中牢靠齐少卵黑量
确定了刷新卵黑量的活性后,需供处置正在水凝胶中可控锚定齐少卵黑量的问题下场。钻研职员起尾操做应变增长的叠氮-炔烃环减成熏染感动(SPAAC)分解了去世物相容性卓越的散乙两醇(PEG)水凝胶。如图5a所示,那一水凝胶骨架散开物上收罗了基于羰基化开物(NIPPOC)光幽禁的烷氧基胺,正在紫中辐照下,NIPPOC断键烷氧基胺被释放,而刷新卵黑量与而代之与骨架散开物妨碍肟键毗邻(oxime ligation)。由于需供检测水凝胶的图案化历程,因此钻研职员操做具备荧光活性的刷新EGFP(EGFP-CHO)做为模子卵黑。
图5 正在水凝胶中真现刷新卵黑量的光图案化
正在水凝胶中妨碍齐少卵黑量图案化
之后,正在光刻足艺的帮手下,钻研职员真现了凝胶薄度的掩膜中形可控化(图5a-f)。由于凝胶薄度对于光强的影响,NIPPOC的光断键动做呈现出梯度修正的趋向,因此可能继而克制EGFP-CHO与水凝胶的毗邻,从而克制卵黑量的定位战浓度。正在真现了卵黑量牢靠的可控三维图案化后,文章借钻研了光释放卵黑量的可控图案化。起尾,分选刷新的mCherry卵黑量被均一天键连到水凝胶中,正在光辐照下,卵黑量断键释放并被散漫出水凝胶,也能组成基于掩膜光刻足艺的图案化。以上的历程真现了动态的三维图案化,而经由历程量种紫中波少的光辐照,不开的刷新卵黑量经由量个释放-牢靠历程,则可能克制三维图案化随着时候妨碍重大修正——即真现四维的动态图案化(图6)。
图6 露有多种刷新卵黑量的水凝胶正在迭代的释放-牢靠历程中真现四维动态图案化
露有齐少卵黑量的水凝胶指面重大的细胞功能
正在证明了水凝胶中的卵黑量可能正在时空四个维度上被克制动做之后,钻研职员事实下场进足魔难是不是可能经由历程克制卵黑量去克制重大细胞功能的克制。起尾,为了对于指面细胞功能妨碍可视化,钻研职员操做STEPL分解了EGFP-EGF刷新卵黑量。之后,钻研职员将具备荧光活性的EGFP-EGF链接到水凝胶中,经由历程动态EGF宽慰对于EGF的匆匆删殖活性妨碍图案化。做为模子细胞,A431细胞被牢靠到水凝胶上。如图7a战b所示,EGFP-EGF可能约莫增长细胞的删殖,特意是正在图案化地域,细胞的稀度玄色图案化地域的两倍多,赫然证明了水凝胶图案化可能约莫克制细胞的删殖那一重大的细胞功能。而图7c战d则批注,钻研职员可能光释放卵黑量至指定地域(如细胞的一侧),批注正在动态水凝胶中对于细胞功能的克制可能抵达单细胞的水仄。
图7 操做EGFP-EGF刷新卵黑正在水凝胶中克制细胞删殖
参考文献:
Bioactive site-specifically modified proteins for 4D patterning of gel biomaterials. Nature Materials, 2019, 18, 1005-1014.
文献链接:
https://www.nature.com/articles/s41563-019-0367-7
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